电泳前染色法 :
	问 : 用 EB 作预制染色剂是否会丢失许多条带 ? 答 : 是的， EB 对于小分子量 DNA 灵敏度较低，在大分子量 DNA 区域会出现背景色 问 : 为什么用 SYBR Green 1 或 GelStar 作预制染色剂有时得不到重复性结果 ? 答 : 这两种染色剂在普通电泳缓冲液或在预制凝胶基质中不稳定。而 GelRed 则非常稳定，可长时间贮存 。		特性: 高灵敏度 GelRed 和 GelGreen 是目前市场中最灵敏的凝胶核酸染料 稳定性极好 可以使用微波炉加热，可以在室温下保存 更安全 艾姆斯氏试验结果表明，该染料的诱变性远小于 溴化乙锭 （ EB ） 广泛的适应性 适用于预制凝胶和凝胶电泳后染色 染色过程简单 与 EB 一样，在预制胶和电泳过程中不必担心染料降解；而电泳后染色过程也只需 30 分钟且无需脱色或冲洗 对 DNA 和 RNA 的迁移影响极小 对核酸迁移的影响小于 SYBR Green I 与标准凝胶成像系统以及可见光激发的凝胶观察装置完美兼容 使用 312nm 激发的 UV 凝胶成像系统时， GelRed 可以完美的替代 EB ；使用 254nm 激发的 UV 凝胶成像系统或可见光激发的凝胶观察装置时， GelGreen 足以替代任意一种 SYBR 染料（见图 4 中的光谱图）
图 1. GelRed TM 在检测低浓度、微量 DNA 方面比 EB 表现出更高的灵敏度，尤其对小分子量的 DNA 检测非常灵敏。 同 EB 预制凝 胶一样， GelRed TM 预制凝胶非常稳定，可长时间贮存。而 SYBRGreen 1 或 GelStar 预制凝胶则会在一天内快速降解 . 。 上图为在 1 × TBE 中分别用 GelRed 和 EB 预制 1% 琼脂糖凝胶中 1Kb Plus DNA Ladder 稀释物的电泳图。从左至右各泳道 DNA 总量分别为 : 200 ng ， 100 ng ， 50 ng and 25 ng 。凝胶用 300nm 透视器显像，用 EB 滤光片和 Polaroid 667 黑白胶片拍照。
电泳后染色法 :
图 2. 不管使用何种滤光片（ A vs. C ）、采取何种贮存和操作环境，对于电泳后染色， GelRed TM 均表现出出色的灵敏度。 SYBR Gold 则不同，只有使用刚从厂商发出的 SYBR Gold ，并且使用 SYBR 滤光片（ B vs. D ）才能达到同样的效果。经过反复几次冷 冻 / 解冻后， SYBR Gold 10,000 × 浓缩液将出现大量分解，染色效果极差（ E ）。 SYBR Gold 1 × 稀释液也一样极不稳定（见图 4 ）。 以上为 1 kb Plus DNA Ladder 稀释物在 1% 琼脂糖凝胶（ 1 × TBE ）中电泳后，分别使用 GelRed TM 和 SYBR Gold 染色，再用 300nm 透视器显像，并用图中所标示的滤光片和 Polaroid 黑白胶片成像后的效果图。每条泳道 DNA 量从左至右分别为 200 ng, 100 ng, 50 ng and 25 ng 。

 G elRed 和 GelGreen 是两种集高灵敏、低毒性和超稳定于一身的极佳的荧光核酸凝胶染色试剂。

目前大多数商业化的核酸燃料（凝胶染色试剂）总是在上述几个方面不完全令人满意。例如，虽然 EB 作为目前使用最广泛的核酸凝胶染色试剂，能够在多数应用中提供可以接受的灵敏度，但它是一种高诱变性的化学物质而且在使用中需要脱色以降低荧光背景，以减少背景荧光信号。 SYBR Green I 和 SYBR Gold 也被厂家宣传为最灵敏的凝胶染色试剂。但 SYBR Green I 尤其是 SYBR Gold 在常用的微碱性电泳缓冲溶液或预制凝胶中会快速降解，导致染色效果极不可靠。 SYBR safe 被认为是市场上较为安全的核酸染料 ，但它的染色效果远差于 SYBR Green I 。

GelRed 和 GelGreen 无论是在预制凝胶还是凝胶电泳后染色中，都表现出了极高的灵敏度。为配合 312 nm UV 凝胶成像系统而设计的 GelRed ，在使用了我们新开发的具有专利的试验步骤后（该试验步骤中使用稀释的 NaCl 溶液替代传统的 TBE 缓冲溶液），在凝胶电泳后染色中优于或者至少相当于 SYBR ? Gold 。但和 SYBR Gold 不同， GelRed 在预制凝胶中使用时仍然有极高的灵敏度。我们新开发的 GelGreen 可以满足使用 488 nm 激光凝胶扫描仪或者可见蓝光激发的 Dark Reader 的研究人员的使用要求。 GelGreen 无论是在预制凝胶还是凝胶电泳后染色中都与 SYBR Green I 灵敏度相当，但不存在后者的稳定性问题。实际上， GelRed 和 GelGreen ，特别是 GelRed 非常稳定，它们的 10,000 ×储液可以长期在室温下保存。当这两种染料稀释在 TBE 或者类似的电泳缓冲溶液中时可以使用微波炉加热，从而与通常制备预制凝胶的方法兼容。含有染料的预制凝胶可以成批制备，并可以保存直到使用。

同样重要的是， GelRed 和 GelGreen 相比 EB 或 SYBR Green I 提高了安全性。 独立的测试服务公司（ Litron Laboratories, Inc. ）进行的标准 艾姆斯氏测试结果表明， 在 18.5 μ g /mL （该浓度远高于推荐用于电泳后染色的 约 4 μ g/mL 的 3X 染色液 ）浓度下， GelGreen 没有诱变性，而 GelRed 也仅在 S9 代谢活化时有微弱的诱变性。 GelRed 和 GelGreen 都有难于进入细胞的化学结构，这个特别设计的结构降低了染料的细胞毒性。相反， SYBR Green I 广泛地用于活细胞线粒体和核 DNA 染色，这正是由于它能快速的被细胞吞入。由于已知 SYBR Green I 对紫外线导致的突变有强烈的增强作用（ Ohta et al. Mutat. Res. 492 , 91(2001) ），因此它的高细胞膜透性使它在紫外观察时成为凝胶染色的主要有害物质。要了解更多详细信息，请从 Biotium 网站下载完整的 GelRed/GelGreen 安全报告。

表 1 是 GelRed 和 GelGreen 完整的产品目录。 GelRed 分别提供了在 H ₂O 、 DMSO 和 DMF 三种溶剂中的 10,000 ×储液以及即用型的 3 ×溶液。 GelGreen 提供在 DMSO 中 的 10,000 ×储液。

图 4. GelGreen （绿色） GelRed （红色）在 PBS 缓冲溶液中结合 dsDNA 后的激发和发射光谱。

图 5. 室温下， GelRed ^TM （ 500 nm ）和 SYBR Gold （ 488 nm ）稀释在 1 × TBE 凝胶染色液中测得的吸光度随时间变化图。 GelRed 和 SYBR Gold 初始的吸光度值分别为 0.029 和 0.051 。